產(chǎn)品貨號(hào) ： B5002

儲(chǔ)存條件 ：試劑盒中 A、B 液 4℃保存；蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（ BSA）置于-20℃保存 ，有效期 12 個(gè)月。

產(chǎn)品描述：

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法。基于雙縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將 Cu2+  還原成 Cu+ ，產(chǎn)生一種紫藍(lán)色復(fù)合物 ，在 562nm處有高的吸光值 ，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。 BCA 蛋白濃度  測(cè)定法實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的簡(jiǎn)便、靈敏、快速和穩(wěn)定性。試劑盒中提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為用戶制作標(biāo)準(zhǔn)曲線提供了便利。 該 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒可用于比色皿法檢測(cè) ，也可用于微孔板法檢測(cè)。前者雖需較大量（ 100μL）的蛋白樣品 ，但由  于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為 1:20（v/v） ，從而降低干擾物質(zhì)帶來(lái)的影響。后者操作簡(jiǎn)單方便 ，僅  需少量（ 10-25μL）的蛋白樣品。不過(guò) ，由于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為 1:8（v/v） ，某種程度上限  制干擾物質(zhì)的承受濃度以及降低*低檢測(cè)水平。本試劑盒含有一系列濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液(BSA 溶液) ，即取即用 ，無(wú)  需稀釋 ，方便快捷。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1）提供即用型標(biāo)準(zhǔn)品 ，省去繁瑣的稀釋步驟。

2）靈敏度高 ，最小檢測(cè)蛋白量可達(dá) 0.2μg ，檢測(cè)濃度下限達(dá)到 10μg/mL(在 20~1000μg/ml  濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān) 系）。

3）速度快 ，比一般的 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒顯色所用時(shí)間短。比傳統(tǒng)的 Lowry 法檢測(cè)速度約快 4 倍。

4）線性范圍廣 ，20-1000μg/mL 濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。

5) 準(zhǔn)確性高：變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)染色法。不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響, BCA 法測(cè)定蛋白濃度,蛋白濃度的測(cè)定可以耐受高濃度的去垢劑, 可以兼容樣品中高達(dá)  5%的 SDS; 5%的 Triton X- 100; 5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響 ，需確保 EDTA 低于  10mM  ，無(wú) EGTA  ，二硫蘇糖醇低于  1mM;  β-巰基乙 醇低于 0.01%。詳情見 7 的附表 1。

6) Bradford 法與 BCA 法的對(duì)比

操作說(shuō)明：以微孔酶標(biāo)儀法為例

1 配置顯色工作液：

a）計(jì)算顯色工作液總量：

工作液總量  = (BSA  標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)＋待測(cè)樣本個(gè)數(shù) ) × 復(fù)孔數(shù)  ×  每個(gè)樣本顯色工作液體積 舉例 ：BSA 標(biāo)準(zhǔn)品樣本個(gè)數(shù)為 8 個(gè) ，待測(cè)樣本個(gè)數(shù) 3 個(gè) ，復(fù)孔數(shù) 3 個(gè)。

顯色工作液總量  = (8個(gè)BSA  標(biāo)準(zhǔn)品樣本＋3 個(gè)待測(cè)樣本 ) ×3 個(gè)復(fù)孔 ×200  μL（每個(gè)樣本工作液體積） = 6.6 mL

b）根據(jù)計(jì)算出的所需顯色工作液用量 ，將試劑 A 和試劑  B 按照  50:1 的體積比 ，配制顯色工作液 ，充分混勻。

注意 ：

1）由于加樣可能存在誤差 ，建議配制 BCA 工作液時(shí) ，多配制  1~2  個(gè)孔的量；

2）新配制的  BCA 工作液室溫密封條件下可穩(wěn)定保存  24 h。

2 定量檢測(cè)

① 分別取即用型 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品① ~⑧ 各 20μL 加到 96 孔板中( BSA 標(biāo)準(zhǔn)品使用前須充分溶解搖勻)；

② 用  1 × PBS 或  0.9% 生理鹽水將樣品適當(dāng)稀釋  (可以多作幾個(gè)梯度 ，如 2 倍、4 倍、8 倍稀釋) ，加 20μL 到 96 孔板的 樣品孔中；

③ 各孔加入 200  μL 顯色工作液 ，充分混勻 ，蓋上 96 孔板蓋 ，37℃孵育 30min ，冷卻至室溫；

注意 ：也可以室溫放置2 h ，或 60℃放置  30min。 BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí) ，吸光度會(huì)隨著時(shí)間的 延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而 加快。如果蛋白濃度較低 ，可在較高溫度孵育 ，  或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

④ 用酶標(biāo)儀測(cè)定每個(gè)樣品及 BSA  標(biāo)準(zhǔn)品的 A562 ，或  540~590 nm 之間的其它波長(zhǎng)的吸光度 ，注意要減去空白對(duì)照(標(biāo) 準(zhǔn)品① + 工作液)的吸光度。

⑤ 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 ，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

注意 ：數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。待測(cè)樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得 , 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制的曲線， 可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出待測(cè)樣品的濃度。

注意事項(xiàng)

1）本產(chǎn)品可以采用酶標(biāo)儀  ( 微孔檢測(cè)法 ) 或者分光光度計(jì)  ( 試管檢測(cè)法 ) 測(cè)定蛋白濃度，如使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定， 需根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大  BCA 工作液的用量使其不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例  放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí) ，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少；

2）試劑在低溫條件或長(zhǎng)期保存可能出現(xiàn)沉淀 ，若發(fā)現(xiàn) BCA 試劑 A 或者試劑 B 有沉淀發(fā)生。請(qǐng) 37oC 溫育并伴隨攪拌促使 其充分溶解。如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染 ，則應(yīng)丟棄。

3）BCA 蛋白測(cè)定法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，需注意保持定時(shí)和定溫，以確保 精確定量。

4）每次測(cè)定都需做相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線 ，因?yàn)轱@色反應(yīng)與溫度和時(shí)間的變化有關(guān) ，精準(zhǔn)蛋白定量宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5）如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì) ( 具體見附表 ) ，可采用其它蛋白定量產(chǎn)品；

6）本公司所有產(chǎn)品僅限用于科研研發(fā) ，必須專業(yè)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！